CY5.5-卵清蛋白（Cy5.5 labeled ovalbumin）是一種重要的熒光標(biāo)記物，由近紅外熒光染料CY5.5與卵清蛋白（ovalbumin, OVA）通過(guò)化學(xué)方法共價(jià)連接而成。以下是對(duì)CY5.5-卵清蛋白的詳細(xì)介紹：

一、組成與結(jié)構(gòu)

CY5.5-卵清蛋白由兩部分組成：近紅外熒光染料CY5.5和載體蛋白卵清蛋白。CY5.5是一種具有優(yōu)異光學(xué)特性的近紅外熒光染料，而卵清蛋白則是一種常用的生物大分子載體，具有多個(gè)反應(yīng)性位點(diǎn)，如賴氨酸殘基上的氨基，可以與CY5.5的活性基團(tuán)（如NHS酯）進(jìn)行共價(jià)連接。

二、特性

1.熒光特性：CY5.5染料的激發(fā)波長(zhǎng)約為675nm，發(fā)射波長(zhǎng)約為695~710nm，處于近紅外區(qū)域。這種長(zhǎng)波長(zhǎng)激發(fā)和發(fā)射的特性使得CY5.5-卵清蛋白在生物成像中具有更深的組織穿透能力和更低的背景自發(fā)熒光干擾，從而提高成像的清晰度和準(zhǔn)確性。

2.光穩(wěn)定性：CY5.5染料在生理?xiàng)l件下穩(wěn)定，不易受到光漂白的影響，能夠保持長(zhǎng)時(shí)間的熒光信號(hào)。這使得CY5.5-卵清蛋白在長(zhǎng)時(shí)間的成像實(shí)驗(yàn)中仍能保持穩(wěn)定的熒光強(qiáng)度，適用于活體成像和實(shí)時(shí)檢測(cè)。

3.生物兼容性：CY5.5是水溶性染料，易于與蛋白質(zhì)結(jié)合，且通常不會(huì)顯著影響蛋白質(zhì)的功能或結(jié)構(gòu)。卵清蛋白也具有良好的生物相容性，因此CY5.5-卵清蛋白在生物體內(nèi)應(yīng)用中具有較高的安全性。

三、應(yīng)用

1.生物成像：CY5.5-卵清蛋白可用于熒光顯微鏡觀察、流式細(xì)胞分析、蛋白質(zhì)印跡等應(yīng)用中。通過(guò)與特定的抗體結(jié)合，可以用于檢測(cè)組織或細(xì)胞中的抗原，實(shí)現(xiàn)熒光成像和定量分析。

2.藥物研發(fā)：CY5.5-卵清蛋白的近紅外熒光發(fā)射特性使其能夠穿透生物組織，因此特別適合用于體內(nèi)成像和藥物分布、代謝等方面的研究。通過(guò)監(jiān)測(cè)CY5.5-卵清蛋白在體內(nèi)的分布和代謝情況，可以為藥物研發(fā)提供重要的信息。

3.免疫研究：卵清蛋白作為常用的載體蛋白，具有良好的免疫原性。CY5.5-卵清蛋白可用于免疫學(xué)研究，如作為免疫原制備抗體、研究免疫反應(yīng)等。

四、合成方法

CY5.5標(biāo)記卵清蛋白的過(guò)程通常包括以下幾個(gè)步驟：

1.將CY5.5-NHS酯溶解在少量無(wú)水有機(jī)溶劑（如DMSO或DMF）中，確保其在水溶液中不會(huì)快速水解。

2.在緩沖溶液中（如pH 8.0左右的PBS緩沖液）加入適量的卵清蛋白溶液。

3.緩慢加入CY5.5-NHS酯溶液到卵清蛋白溶液中，同時(shí)輕輕攪拌，以促進(jìn)酯與蛋白質(zhì)氨基的偶聯(lián)反應(yīng)。通常在室溫或冰浴條件下反應(yīng)1~2小時(shí)。

4.調(diào)整pH值以保持在8.0附近，有助于提高酰胺鍵的形成效率。

5.使用凝膠過(guò)濾或透析的方法去除未反應(yīng)的CY5.5-NHS酯和其他小分子。

6.純化后得到的CY5.5標(biāo)記卵清蛋白可以通過(guò)吸光度和熒光光譜測(cè)定標(biāo)記效率。

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