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蛋白A磁珠的介紹

2025-09-15 [167]

蛋白A磁珠是一種基于蛋白A與免疫球蛋白Fc段特異性結(jié)合原理設(shè)計(jì)的磁性微粒,廣泛應(yīng)用于抗體純化、免疫沉淀(IP)、共免疫沉淀(Co-IP)等生物化學(xué)和分子生物學(xué)研究領(lǐng)域。以下是對(duì)蛋白A磁珠的詳細(xì)介紹:

一、基本原理

蛋白A磁珠的核心成分是重組蛋白A,它能夠特異性地結(jié)合多數(shù)哺乳動(dòng)物IgG的Fc端(如小鼠、人、兔、豬、犬和貓等)。每個(gè)蛋白A分子可結(jié)合多個(gè)IgG分子(通常為5個(gè)),從而實(shí)現(xiàn)對(duì)抗體的高效捕獲和純化。磁珠本身具有超順磁性,在外磁場(chǎng)作用下可快速分離,撤去磁場(chǎng)后易于分散,便于實(shí)驗(yàn)操作。

二、物理特性

  1. 粒徑:通常為納米級(jí)(如200nm)或微米級(jí)(如1μm),具體取決于產(chǎn)品設(shè)計(jì)和應(yīng)用需求。

  2. 比表面積:納米級(jí)磁珠具有超大比表面積,便于快速結(jié)合抗體或抗體復(fù)合物。

  3. 磁響應(yīng)性:超順磁性設(shè)計(jì)確保磁珠在外磁場(chǎng)作用下快速分離,且撤去磁場(chǎng)后無(wú)剩磁,易于分散。

三、核心優(yōu)勢(shì)

  1. 高容量:結(jié)合容量高,每次實(shí)驗(yàn)的樣品用量更少。

  2. 低非特異性結(jié)合:穩(wěn)定的預(yù)封閉磁珠設(shè)計(jì)可減少非特異性吸附,提供高純度的產(chǎn)物。例如,在免疫沉淀實(shí)驗(yàn)中,洗脫的抗原中不含來(lái)自復(fù)雜細(xì)胞裂解物的污染性蛋白。

  3. 高效分離:磁珠可消除樹脂損耗,與僅使用離心管的傳統(tǒng)IP方法相比,分離效率更高。

  4. 兼容性:兼容手動(dòng)和自動(dòng)化操作(如Thermo Scientific KingFisher儀器),適用于高通量工作流程。

四、主要應(yīng)用

  1. 抗體純化:從血清、細(xì)胞培養(yǎng)物上清液或腹水中純化抗體。

  2. 免疫沉淀(IP):捕獲細(xì)胞或組織提取物中的抗原-抗體復(fù)合物。

  3. 共免疫沉淀(Co-IP):研究蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)。

  4. 其他應(yīng)用:如抗原表位分析、蛋白質(zhì)復(fù)合物純化等。

、注意事項(xiàng)

  1. 避免離心:離心可能導(dǎo)致磁珠聚集,降低結(jié)合能力。

  2. 避免干燥:磁珠干燥可能導(dǎo)致不可逆的損傷,影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

  3. 儲(chǔ)存條件:通常建議在2-8℃下儲(chǔ)存,避免冷凍。

  4. 單次使用:多數(shù)蛋白A磁珠設(shè)計(jì)為單次使用,重復(fù)使用可能影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

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