Biotin-4-fluorescein（生物素-4-熒光素）是一種結(jié)合生物素與熒光素分子的熒光標記化合物，在生物學和醫(yī)學研究中具有廣泛應用。

一、基本信息

• CAS號：1032732-74-3

• 分子式：C??H??N?O?S

• 分子量：644.694 g/mol

• 外觀：橙黃色固體

• 溶解性：可溶于水和大多數(shù)有機溶劑，如DMSO、PBS等

• 穩(wěn)定性：在避光和低溫條件下儲存時較為穩(wěn)定，需避免反復凍融

結(jié)構(gòu)式：

二、結(jié)構(gòu)與功能

• 生物素部分：具有與親和素（如鏈霉親和素）高親和力結(jié)合的特性，確保了檢測的準確性和靈敏度。

• 熒光素部分：提供熒光信號，激發(fā)波長約為494 nm，發(fā)射波長約為521 nm（也有說法為518 nm），適用于熒光顯微鏡、流式細胞術(shù)或ELISA等檢測技術(shù)。

• 連接臂：通常為4個碳原子的間隔臂，可減少空間位阻，提高標記效率。

三、物理化學性質(zhì)

• 密度：1.6±0.1 g/cm3（也有預測值為1.55±0.1 g/cm3）

• 沸點：1038.0±65.0 °C（在760 mmHg條件下，為預測值）

• pH影響：熒光特性受pH影響，在堿性條件下熒光較強，熒光強度在pH 8-9時較高，需優(yōu)化緩沖液條件。

• 光穩(wěn)定性：熒光素易光漂白，操作時需避光并減少曝光時間。

四、應用領(lǐng)域

1. 生物分子標記：

• 標記蛋白質(zhì)、核酸等生物分子，簡化實驗步驟。

• 標記抗體或核酸探針，用于細胞或組織成像（免疫熒光染色）。

2. 熒光檢測：

• 適用于熒光顯微鏡、流式細胞術(shù)等檢測技術(shù)。

• 標記細胞表面生物素化抗體，結(jié)合熒光素信號分析細胞亞群。

3. 免疫分析：

• 結(jié)合到抗體上，用于ELISA、Western blot等免疫檢測方法，提升檢測靈敏度和特異性。

• 通過生物素-親和素系統(tǒng)放大信號，提高檢測靈敏度。

4. 定量分析：

• 用于準確定量生物樣品中親和素與鏈霉親和素的濃度。

• 評估生物素結(jié)合位點或確定親和素/鏈霉親和素的濃度。

五、儲存與使用注意事項

• 儲存條件：建議室溫避光保存，或根據(jù)具體產(chǎn)品要求在-20°C下儲存。

• 使用注意事項：

• 操作時需避光，減少熒光素的曝光時間，以防止光漂白。

• 需優(yōu)化緩沖液條件，以確保熒光強度在最佳范圍內(nèi)。

• 僅用于科研，不能用于人體實驗。

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