乳香酸-牛血清白蛋白偶聯(lián)物|Boswellic Acid-Bovine Serum Albumin Conjugate(Boswellic Acid-BSA Conjugate)

乳香酸 - 牛血清白蛋白偶聯(lián)物的制備方法有多種，以下是一些常見(jiàn)的方法：

碳二亞胺法：

原理：碳二亞胺（EDC）使羧基和氨基間脫水形成酰胺鍵，從而將乳香酸（含有羧基）與牛血清白蛋白（含有氨基）偶聯(lián)起來(lái)。

步驟：

將乳香酸溶解在適當(dāng)?shù)娜軇┲校蛊漪然┞丁?/span>

將牛血清白蛋白溶解在另一種適當(dāng)?shù)娜軇┲小?/span>

在一定條件下，將 EDC 加入到乳香酸溶液中，攪拌一段時(shí)間，使乳香酸的羧基與 EDC 反應(yīng)生成一個(gè)中間物。

然后將牛血清白蛋白溶液緩慢加入到上述反應(yīng)體系中，繼續(xù)攪拌反應(yīng)一定時(shí)間。

反應(yīng)結(jié)束后，通過(guò)透析或其他合適的方法去除未反應(yīng)的物質(zhì)和副產(chǎn)物，得到乳香酸 - 牛血清白蛋白偶聯(lián)物。

混合酸酐法：

原理：半抗原上的羧基在正丁胺存在下與氯甲酸異丁酯反應(yīng)，形成混合酸酐的中間體，再與蛋白質(zhì)的氨基反應(yīng)，形成半抗原與蛋白質(zhì)的結(jié)合物。

步驟：

將乳香酸溶解在含有正丁胺的有機(jī)溶劑中。

在低溫下，將氯甲酸異丁酯緩慢滴加到上述溶液中，攪拌反應(yīng)，生成混合酸酐中間體。

將牛血清白蛋白溶解在適當(dāng)?shù)木彌_溶液中。

將含有混合酸酐中間體的溶液緩慢滴加到牛血清白蛋白溶液中，在一定溫度下攪拌反應(yīng)一段時(shí)間。

反應(yīng)結(jié)束后，進(jìn)行透析或其他純化步驟，以去除未反應(yīng)的試劑和雜質(zhì)，得到乳香酸 - 牛血清白蛋白偶聯(lián)物。

戊二醛法：

原理：雙功能試劑戊二醛的兩個(gè)醛基分別與半抗原（乳香酸）和蛋白質(zhì)（牛血清白蛋白）上的氨基形成 Schiff 鍵（-N=C＜），在半抗原和蛋白質(zhì)間引入一個(gè)五碳橋。

步驟：

將乳香酸和牛血清白蛋白分別溶解在適當(dāng)?shù)木彌_溶液中。

將一定量的戊二醛溶液加入到乳香酸溶液中，攪拌反應(yīng)一段時(shí)間，使乳香酸與戊二醛發(fā)生初步反應(yīng)。

然后將牛血清白蛋白溶液緩慢加入到上述反應(yīng)體系中，繼續(xù)攪拌反應(yīng)。

反應(yīng)結(jié)束后，通過(guò)透析或其他方法去除未反應(yīng)的戊二醛和其他雜質(zhì)，得到乳香酸 - 牛血清白蛋白偶聯(lián)物。

琥珀酸酐法：

原理：半抗原的羥基與琥珀酸酐在無(wú)水吡啶中反應(yīng)得到一個(gè)琥珀酸半酯（帶有羧基的中間體），再經(jīng)碳二亞胺法或混合酸酐法與蛋白質(zhì)氨基結(jié)合，在半抗原與蛋白質(zhì)載體間插入一個(gè)琥珀酰基。

步驟：

乳香酸如果含有羥基，先將其與琥珀酸酐在無(wú)水吡啶中反應(yīng)，生成帶有羧基的琥珀酸半酯中間體。

然后按照碳二亞胺法或混合酸酐法的步驟，將該中間體與牛血清白蛋白進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)。

最后進(jìn)行純化處理，得到乳香酸 - 牛血清白蛋白偶聯(lián)物。

羰基二咪唑法：

原理：N,N - 羰基二咪唑是引入羰基的高活性試劑，含羧基的分子同羰基二咪唑反應(yīng)，形成中間體咪唑基甲酸酯，它能和 N - 親核試劑反應(yīng)，得到 N - 烷基化的甲酸酯鍵，通常蛋白質(zhì)通過(guò) N - 端（α- 氨基）和賴氨酸側(cè)鏈的（ε- 氨基）和分子形成不帶電的類(lèi)似尿烷的衍生物，具有較好的化學(xué)穩(wěn)定性。

步驟：

將乳香酸溶解在適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)溶劑中。

加入 N,N - 羰基二咪唑，攪拌反應(yīng)，使乳香酸與羰基二咪唑反應(yīng)生成中間體。

將牛血清白蛋白溶解在合適的緩沖溶液中。

將含有中間體的溶液與牛血清白蛋白溶液混合，攪拌反應(yīng)一定時(shí)間。

反應(yīng)完成后，通過(guò)透析或其他純化手段去除未反應(yīng)的物質(zhì)和副產(chǎn)物，獲得乳香酸 - 牛血清白蛋白偶聯(lián)物。

在選擇制備方法時(shí)，需要考慮乳香酸和牛血清白蛋白的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)、反應(yīng)條件的溫和性、產(chǎn)物的純度和產(chǎn)率等因素。同時(shí)，為了確保偶聯(lián)物的質(zhì)量和活性，還需要對(duì)偶聯(lián)反應(yīng)進(jìn)行優(yōu)化和條件摸索。此外，制備過(guò)程中應(yīng)注意使用適當(dāng)?shù)脑噭┖驮O(shè)備，并遵循嚴(yán)格的操作規(guī)程，以保證實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性。