6’-Sialyllactose（6'-唾液酸乳糖）的制備方法主要包括化學(xué)合成法和生物合成法（酶催化反應(yīng)與微生物發(fā)酵），以下是具體介紹：

化學(xué)合成法

• 原理：以唾液酸和乳糖為起始原料，在特定的反應(yīng)條件下通過(guò)糖苷鍵的形成反應(yīng)合成6’-Sialyllactose。

• 過(guò)程：通常涉及保護(hù)基策略，以逐步構(gòu)建糖苷鍵。這種方法需要高純度的唾液酸和乳糖原料，且反應(yīng)條件較為苛刻，可能涉及強(qiáng)酸、強(qiáng)堿等條件，但收率可能較低且難以實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。

生物合成法

1. 酶催化反應(yīng)

• 原理：利用特定的糖基轉(zhuǎn)移酶（如α2,6-唾液酸轉(zhuǎn)移酶）將唾液酸轉(zhuǎn)移到乳糖上，形成6’-Sialyllactose。

• 過(guò)程：通過(guò)基因工程技術(shù)將編碼糖基轉(zhuǎn)移酶的基因?qū)胨拗骷?xì)胞（如大腸桿菌、枯草芽孢桿菌等），使宿主細(xì)胞能夠表達(dá)并分泌這些酶。然后，在含有乳糖和唾液酸的培養(yǎng)基中培養(yǎng)這些宿主細(xì)胞，通過(guò)酶催化反應(yīng)合成6’-Sialyllactose。

2. 微生物發(fā)酵

• 原理：通過(guò)基因工程技術(shù)構(gòu)建能夠從頭合成6’-Sialyllactose的微生物細(xì)胞工廠。

• 過(guò)程：例如，有研究通過(guò)改造枯草芽孢桿菌，引入來(lái)源于腦膜炎奈瑟菌的NeuC、NeuB、NeuA以及來(lái)源于發(fā)光桿菌屬希帕菌JT-ISH-224的α2,6-唾液酸轉(zhuǎn)移酶，成功構(gòu)建了6’-Sialyllactose的從頭合成途徑。通過(guò)微調(diào)啟動(dòng)子強(qiáng)度、敲除競(jìng)爭(zhēng)抑制途徑基因以及對(duì)前體合成基因拷貝數(shù)進(jìn)行優(yōu)化，進(jìn)一步提高了6’-Sialyllactose的產(chǎn)量。

  
  

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