乳糖 - N - 三糖（LNT）的制備方法主要圍繞 “化學(xué)合成"“酶催化合成" 和 “天然提取" 三大技術(shù)路徑展開，不同方法在效率、純度和應(yīng)用場(chǎng)景上存在差異，具體如下：
通過化學(xué)試劑調(diào)控糖苷鍵的形成，實(shí)現(xiàn)單糖單元（半乳糖、葡萄糖、N - 乙酰氨基葡萄糖）的定向連接，核心是解決糖苷鍵的 regioselectivity（區(qū)域選擇性）和 stereoselectivity（立體選擇性）問題。
關(guān)鍵步驟：
對(duì)單糖原料的羥基進(jìn)行保護(hù)（如使用乙?；?、芐基），避免非目標(biāo)位點(diǎn)反應(yīng)；
活化供體糖（如將半乳糖制成三氯乙酰亞胺酯供體），與受體糖（如乳糖或葡萄糖）在催化劑（如三氟甲磺酸三甲基硅酯）作用下形成目標(biāo)糖苷鍵；
脫除保護(hù)基團(tuán)，純化得到乳糖 - N - 三糖。
利用酶（主要是糖苷轉(zhuǎn)移酶）的專一性，高效催化糖苷鍵形成，是目前工業(yè)級(jí)制備 LNT 的主流方向，分為 “單酶催化" 和 “多酶級(jí)聯(lián)催化" 兩種策略。
使用特定糖苷轉(zhuǎn)移酶，直接將 N - 乙酰氨基葡萄糖（GlcNAc）轉(zhuǎn)移到乳糖（Galβ1-4Glc）的特定羥基上，形成 LNT 的核心結(jié)構(gòu)（Galβ1-4Glcβ1-3GlcNAc）。
常用酶類：β-1,3-N - 乙酰氨基葡萄糖轉(zhuǎn)移酶（如來(lái)自大腸桿菌的 LgtA 酶），需搭配糖核苷酸供體（如 UDP-GlcNAc，尿苷二磷酸 - N - 乙酰氨基葡萄糖）提供糖基。
特點(diǎn)：反應(yīng)特異性高，副產(chǎn)物少，反應(yīng)條件溫和（常溫、近中性 pH），易控制。
通過構(gòu)建 “供體合成 - 糖基轉(zhuǎn)移 - 產(chǎn)物釋放" 的酶促反應(yīng)體系，解決單酶催化中 “糖核苷酸供體成本高" 的問題，實(shí)現(xiàn)原料（如葡萄糖、GlcNAc、ATP/UDP 等）到 LNT 的一步轉(zhuǎn)化。
從天然富含 LNT 的原料中分離純化，主要來(lái)源是人乳（人乳寡糖中 LNT 含量約 0.5-1.5 g/L）或部分哺乳動(dòng)物乳汁（如牛初乳，含量遠(yuǎn)低于人乳）。
關(guān)鍵步驟：
原料預(yù)處理：去除乳汁中的蛋白質(zhì)（如離心、酸沉）、脂肪（如脫脂）；
寡糖分離：通過超濾（去除大分子）、離子交換層析（去除帶電雜質(zhì)）、凝膠過濾層析（按分子量分離）等步驟富集 LNT；
純化結(jié)晶：通過高效液相色譜（HPLC）精制，得到高純度 LNT。
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2025-09-18
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