磁珠法提取全血gDNA的流程主要分為裂解、結(jié)合、洗滌、洗脫四個核心步驟，具體操作及原理如下：

一、裂解

• 操作：取200μL全血樣品，加入200μL裂解液（含GuHCl/SDS）和10μL蛋白酶K，充分混勻后于55°C水浴10分鐘。

• 原理：裂解液中的GuHCl和SDS能夠破壞細胞膜和核膜，使gDNA從細胞中釋放出來。同時，加入RNA酶A（10μg/mL）可去除RNA干擾，確保提取的gDNA純度。

二、結(jié)合

• 操作：加入300μL結(jié)合緩沖液和20μL磁珠（使用前顛倒或吹吸混勻），顛倒混勻10分鐘。將離心管置于磁力架上1分鐘，使磁珠被吸附，移走管內(nèi)液體。

• 原理：調(diào)節(jié)pH至5.0-6.5（羧基磁珠最佳結(jié)合條件），創(chuàng)造高鹽環(huán)境，屏蔽DNA磷酸基團的負電荷，促進其與磁珠表面官能團（如羧基、氨基等）的結(jié)合。磁珠表面修飾的官能團通過靜電作用或共價鍵與DNA的磷酸骨架結(jié)合，實現(xiàn)特異性吸附。

三、洗滌

• 操作：加入500μL洗滌緩沖液Ⅰ，顛倒混勻數(shù)次后利用磁力架吸附磁珠，1分鐘后移走管內(nèi)液體。重復(fù)上述步驟，依次使用洗滌緩沖液Ⅱ和洗滌緩沖液Ⅲ進行洗滌。

• 原理：使用70%乙醇等洗滌液去除鹽分和雜質(zhì)（如蛋白質(zhì)、多糖等）。通過多次洗滌，確保磁珠表面清潔，提高gDNA的純度。

四、洗脫

• 操作：加入50-100μL洗脫緩沖液（如TE緩沖液，pH 8.0），使磁珠重新懸浮，55°C水浴10分鐘，其間輕輕晃動使DNA充分洗脫。將離心管置于磁力架1分鐘，使磁珠被吸附，將液體轉(zhuǎn)移至新的離心管中，得到純化的DNA產(chǎn)物。

• 原理：使用低鹽緩沖液（如TE緩沖液）改變環(huán)境，破壞靜電和氫鍵作用，使DNA從磁珠上解吸附下來。通過加熱和輕輕晃動，促進DNA的洗脫效率。

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